人角质形成细胞与MV3人黑素瘤细胞体外构建人工皮肤黑素瘤组织模型

目的 用人角质形成细胞(KC)和MV3人黑素瘤细胞混合接种培养于去表皮的真皮(DED),体外构建人工皮肤黑素瘤组织模型,探讨KC对黑素瘤侵袭性的影响.方法 用两步酶消化法处理小儿包皮,获得表皮细胞悬液,用KC无血清培养基培养并传代KC.用RPMI 1640培养基培养及传代MV3人黑素瘤细胞.分别取对数生长期KC、MV3人黑素瘤细胞制备细胞悬液.将KC、MV3人黑素瘤细胞悬液接种于DED表面(KC:MV3人黑素瘤细胞约为3:1).采用液下培养和空气-液面培养相结合方式进行混合培养,2周后取出进行HE染色、S-100蛋白、HMB45及角蛋白免疫组化染色.结果 HE染色显示,MV3人黑素瘤细胞在DED表面形成条带状瘤团或瘤灶,KC间杂于瘤细胞间,未形成典型的表皮样结构;部分瘤细胞浸润到DED浅层,呈群聚性分布;瘤细胞侵入DED管腔内,呈环形附着于管壁上,部分瘤细胞穿过管壁进入周围真皮组织;在DED底面及侧面,瘤细胞呈单个细胞弥散状浸润分布.瘤灶S-100蛋白阳性表达,HMB45弱阳性表达,角蛋白阳性表达.结论 KC增强MV3人黑素瘤细胞在人工皮肤黑素瘤组织模型中的侵袭.