脑胶质母细胞瘤干细胞球中标记滞留细胞表型研究

目的 对悬浮培养的脑胶质母细胞瘤干细胞球中的标记滞留细胞进行表型研究.方法 通过荧光标记滞留分析区分胶质母细胞瘤干细胞球中的标记滞留细胞及标记阴性细胞;通过体外克隆分析比较上述两类细胞的自我更新能力;以Western blot检测分化前后分化标记物的表达,评估其体外分化能力;给予放、化疗处理后检测细胞增殖,评估其放、化疗敏感性;通过免疫缺陷鼠颅内种植,评估其成瘤能力.结果 胶质瘤干细胞球细胞经初始DiI荧光标记示踪2周后,可区分慢增殖的DiI滞留细胞,其比例＜10％及快增殖的DiI阴性细胞.DiI滞留细胞经多次传代克隆分析,其克隆成球率保持恒定,而DiI阴性细胞呈显著下降(P＜0.05).DiI滞留细胞分化后分化标记物GFAP,PDGFRα以及βⅢ-tubulin蛋白表达相对于分化前显著上调(P＜0.05).给予10 Gy剂量照射或500μm/l替莫唑胺处理72 h后,DiI滞留细胞增殖相对于处理前无显著改变,而DiI阴性细胞增殖显著下降(P＜0.05).仅约100个DiI滞留细胞在最长追踪观察6个月时在免疫缺陷鼠颅内已可成瘤,而相应数量的DiI阴性细胞未能成瘤.结论 胶质母细胞瘤干细胞球中呈现慢增殖特性的标记滞留细胞相对于标记阴性细富集了肿瘤干细胞.