固相萃取-高效液相色谱串联质谱测定人体尿液中芳香化合物代谢物的方法研究

目的 建立固相萃取-高效液相色谱串联质谱(high performance liquid chromatographic tandem mass spectrometric,HPLC-MS/MS)同时测定尿液中8种芳香化合物代谢物(苯巯基尿酸、甲基马尿酸、N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸、苯乙醛酸、苯乙醇酸、对氨基酚、对硝基酚和1-羟基芘)的方法.方法 取1 mL尿液,加入20μLβ-葡萄糖醛酸酶和1 mL乙酸铵缓冲溶液,在37℃孵箱中酶解20 h.酶解后混匀,取适量酶解液注入PrimeHLB固相萃取柱净化,4 mL乙腈洗脱,洗脱液氮吹至干,用0.20 mL甲醇复溶后进样HPLC-MS/MS系统分析.高效液相色谱分离采用反相C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),流动相A为含体积分数0.1％甲酸的水,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,流速为0.2 mL/min.质谱采用正、负离子交替扫描方式,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式检测,内标标准曲线法定量.结果 8种代谢物在1～100 ng/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995,测定的精密度(relative standard deviation,RSD)在0.05％～9.95％之间,8种代谢物的检出限在0.041～0.12 ng/mL范围内.将所建立的方法用于尿样分析,加标回收率为80.1％～114.0％.结论 所建立的方法灵敏、快速、准确,适用于普通人群和职业人群的芳香化合物生物监测评估.