冻干法制备VEGFR2靶向超声微泡体外寻靶及显影实验

目的 采用冻干法制备血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)靶向超声造影剂,并评价其体外寻靶能力及超声显影效果.方法 冻干法制备生物素化微泡,将链霉亲和素及VEGFR2单克隆抗体依次连接至生物素化微泡,构建VEGFR2靶向超声微泡.采用免疫荧光染色法验证链霉亲和素及大鼠抗小鼠VEGFR2单克隆抗体与微泡的结合情况.观察及检测VEGFR2靶向超声微泡的形态、大小及分布.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)至对数期,分3组,分别为非靶向超声微泡组(加入非靶向微泡1×10 7个)、抗体预饱和+VEGFR2靶向微泡组(加入过量的VEGFR2抗体孵育后,再加入VEGFR2靶向超声微泡1×107个)及VEGFR2靶向超声微泡组(加入VEGFR2靶向超声微泡1×107个),比较各组微泡与细胞的结合情况.采用自制体外循环装置并采集超声图像,检测VEGFR2靶向超声微泡体外显影能力.结果 通过免疫荧光染色法的验证,链霉亲和素及大鼠抗小鼠VEGFR2单克隆抗体可与生物素化微泡结合构建VEGFR2靶向超声微泡.VEGFR2靶向微泡光学显微镜下呈圆形,大小一致且分布均匀,平均直径为(1.31±0.93) μm.显微镜下见非靶向微泡组HUVEC周围可见少量微泡结构,抗体预饱和+ VEGFR2靶向超声微泡组HUVEC周围几乎无微泡结构,VEGFR2靶向超声微泡组HUVEC周围可见较多微泡结构存在.在超声增强模式下自制微泡显影效果良好,随造影时间延长无明显衰减.结论 冻干法可制备VEGFR2靶向超声造影剂,在体外实验中具有良好的寻靶能力且超声辐照下可显影.