产顺式-4-L-羟脯氨酸工程菌的构建及转化条件的优化

[目的]构建产顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hyp)的工程菌并优化其转化条件.[方法]通过调整大肠杆菌的密码子偏好性以及mRNA二级结构对顺式-4-L-脯氨酸羟化酶(cis-P4H)基因进行优化,构建该基因的表达菌株.采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化cis-P4H,测定cis-P4H的酶活和稳定性.然后采用全细胞催化法制备cis-4-Hyp,通过单因素试验和正交试验对相关的转化条件进行优化.[结果]构建了一株产cis-4-Hyp的工程菌,cis-P4H的比活为2.65 U/mg,半衰期为2.32 h.经过条件优化后,采用OD600为0.9时加入IPTG获得的工程菌菌体构建转化体系,在转化体系pH 6.5,转化温度为31℃,转化时间为60 h时,L-脯氨酸转化率最高达到83.33％.[结论]研究获得的工程菌及转化条件具有良好的工业应用前景.