一个新的二色补血草金属硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表达分析

从二色补血草cDNA文库中分离出一个新的金属硫蛋白基因LbMT2全长cDNA序列.该基因全长518 bp,其中5'非翻译区(UTR)64 bp,3'非翻译区205 bp,开放阅读框(ORF)249 bp,编码由82个氨基酸组成的蛋白质,编码蛋白的分子量为8.1 kDa,理论等电点(pI)为4.72.利用实时定量PCR方法研究了二色补血草在CuSO4、CdCl2、NaCl、低温和PEG胁迫下不同时间该基因的表达模式.结果表明,CuSO4、CdCl2、NaCl和低温处理均能诱导LbMT2基因在二色补血草的根和叶中的表达,而PEG处理则抑制了LbMT2在根和叶中的表达.构建LbMT2基因的原核表达载体pGEX-LbMT2,通过IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中融合表达,SDS-PAGE电泳获得35 kDa的蛋白条带,大小与预期相符.