酶联免疫斑点直接法与预孵育法检测胰岛抗原特异性T细胞反应的比较

目的:探讨酶联免疫斑点（ELISPOT）加速树突状细胞成熟的预孵育法（acDCs）和直接检测法检测1型糖尿病（T1DM）患者外周血中胰岛全长抗原特异性T细胞反应的优劣。方法:选取2012年3月至2014年8月中南大学湘雅二医院代谢内分泌科就诊的T1DM患者16例（男9例，女7例），年龄（28.5±9.4）岁，病程6.0（2.8~8.3）个月；另纳入年龄、性别匹配的健康对照12名；ELISPOT-acDCs法和直接检测法检测3种胰岛抗原谷氨酸脱羧酶65（GAD 65）、C肽、胰岛素（INS）特异性干扰素-γ（IFN-γ）分泌性CD4 + T细胞反应的斑点数，比较不同检测方法下各种胰岛抗原及联合3种抗原特异性T细胞反应的阳性比例。 结果:ELISPOT-acDCs法检测T1DM患者GAD 65特异性IFN-γ分泌性CD4 + T细胞反应的阳性比例为1/16，INS反应阳性比例为6/16，C肽反应阳性比例为4/16，其中INS反应阳性比例高于健康对照组的0/12（ P=0.024）；联合3种抗原的T细胞阳性比例为9/16，明显高于健康对照组的1/12（ P=0.016）。ELISPOT直接法检测GAD 65特异性T细胞反应阳性比例为2/16，INS反应阳性比例为1/16，C肽反应阳性比例7/16，其中C肽反应阳性比例高于健康对照组的1/12，但差异无统计学意义（ P=0.088）。联合3种抗原检测T细胞反应阳性比例8/16，高于健康对照组的1/12（ P=0.039）；与直接法比较，仅acDCs法检测下的INS特异性T细胞反应阳性比例较高（ P=0.041）；两种方法在余各抗原间比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:多种全长胰岛抗原ELISPOT-acDCs法及直接法检测胰岛抗原特异性T细胞反应均可为T1DM患者提供细胞免疫学分型诊断价值；ELISPOT-acDCs法检测INS特异性T细胞反应的灵敏度优于ELISPOT直接检测法。