Maroteaux-Lamy综合征的ARSB基因分析及新突变的 致病性鉴定

[目的]对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征(MPSⅥ)的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测和新突变的致病性鉴定,以揭示其分子发病机制,为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件.[方法]在临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上,抽取患儿及其父母EDTA抗凝血,进行ARSB基因的PCR扩增和Sanger测序.对所发现的新突变,在经HGMD、1000G和ExAC等数据库核实排查后,首先用SWISS-MODEL软件分析、比对突变蛋白和正常蛋白的空间构象,然后用Clustal X软件分析跨物种氨基酸的保守性,用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2软件预测新突变的致病性,最后用ACMG标准对新突变的致病性进行综合分析鉴定.[结果]1)7个家系先证者的基因检测结果分别为:No1:c.574T>C,p.C192R纯合错义突变;No2:c.160G>A/p.D54N(来自其母)和c.1197C>G/p.F399L(来自其父)的复合杂合子;No3:仅检出c.1072G>A/p.V358M和IVS5 as(-27)A>C变异,但酶检和临床表型符合VI型;No4:为c.281C>T,p.S94L(新突变,来自其母)和IVS5 as(-27)A>C(来自其父)的复合杂合子;No5:为c.1197 C>G,p.F399L纯合错义突变;No6:为c.1197 C>G,p.F399L(来自其母)和c.1379 C>T,p.S460F(新突变,来自其父)的复合杂合子;No7:为c.499 G>A,p.G167R(来自其父)和c.1325C>T,p.T442M(来自其母)的复合杂合子.2)新突变鉴定结果:对正常ARSB酶蛋白和p.S94L突变酶蛋白的空间构象的预测比对结果显示,两者有明显区别;跨物种保守性分析结果显示,p.94突变点所在氨基酸(S)在物种进化过程中具有高度保守性;PROVEAN、SIFT和PolyPhen-2软件对p.S94L预测结果分别为:Deleterious、Damaging和Probably damaging.用上述方法对p.S460F的预测结果及ACMG的综合分析结果也显示该突变可能是致病性的.[结论]1)家系4的p.S94L和家系6的p.S460F新突变可能都是新的致病性突变,有可能都是引起患儿发病的内在原因之一.2)家系1,2,5,6,7可以确诊为MPS VI型,其基因型和表现型具有显著的相关性,家系3虽经酶检确诊,临床症状和尿检结果也都与MPS VI型符合,但却未能在DNA水平查到明确的突变类型,其表现型与基因型的相关性还有待进一步证实.