Pannexin1,2在小鼠睾丸癌I-10细胞和睾丸间质细胞TM3中的表达及通道功能调控

目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控. 方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100 μmol/L的甘珀酸(CBX)、200 μmol/L的丙磺舒(PBN)作用于I-10细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力;化学发光法检测细胞外ATP浓度;分别干扰(shRNA)和过表达(mPanx-1)Panx-1基因,调控Panx-1蛋白的表达及功能. 结果:Western印迹结果显示,与TM3细胞相比,I-10细胞中Panx-1和Panx-2的表达量分别增加(289.5±55.8)％(P＜0.05)和(264.5±24.6)％(P＜0.05);采用CBX和PBN处理后,实时荧光实验和化学发光法结果显示,与对照组相比,CBX组和PBN组平均荧光物质转运量下降(87.5±17.7)％和(89.3±14.3)％(P＜0.01),细胞外ATP水平在8、16、24 h时分别下降(57.3±7.2)％、(56.4±9.6)％,(63.4 ±6.4)％、(61.7±2.5)％,(35.8±1.6)％、(13.5±8.3)％(P＜0.01);shRNA和mPanx-1处理后,Western印迹结果显示,与阴性对照组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-1的表达量下降(38.3±5.2)％和(31.8±5.1)％(P＜0.01),mPanx-1组Panx-1的表达量增加(128.4±7.5)％(P＜0.01),且实时荧光实验和化学发光法结果显示,shRNA组荧光物质转运量下降(72.4±39.4)％(P＜0.01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别下降(14.7±0.1)％、(13.7±0.3)％、(13.1±0.3)％(P＜0.01);mPanx-1组荧光物质转运量增加(122.5±.17.1)％(P＜0.01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别增加(886.1±82.1)％、(885.8±83.3)％、(841.5±21.8)％(P＜0.01). 结论:Panx-1和Panx-2在小鼠睾丸癌I-10细胞中表达增多,CBX和PBN及shRNA抑制Panx通道后,睾丸癌I-10细胞荧光传递能力减弱和细胞外ATP水平下降.