沉默Robo基因对人膀胱移形上皮癌细胞T24增殖的影响

[目的]研究Robo蛋白在人膀胱移形上皮癌细胞(T24)中的表达及沉默Robo基因对T24细胞增殖的影响.[方法]实验分为两组,对照组(不转染载体)和转染组(转染复合载体),每组20例.对照组体外培养T24细胞,用免疫组织化学、免疫荧光和蛋白质印迹检测是否有Robo蛋白的表达及其表达亚型;转染组利用RNA干扰技术,寻找表达基因的沉默位点,构建合理的表达载体,转染T24细胞,免疫荧光化学观察细胞转染结果,蛋白质印迹来检测该表达基因沉默后蛋白表达的变化,MTT检测该表达基因沉默后细胞存活率变化.[结果]①免疫组化和免疫荧光检测显示T24细胞中有Robo1和Robo4表达,且表达差异无统计学意义(P=0.363和P=0.241),而正常膀胱移行上皮细胞中无表达,蛋白质印迹证实了免疫组化结果(P=0.205).②沉默Robo基因后,T24细胞中Robo1和Robo4的表达受到抑制,尤其是Robo1的表达几乎受到全部抑制(免疫荧光P=0.002,蛋白印迹P=0.0001),MTT法检测显示Robo1干扰组细胞的存活率明显下降,与对照组及Robo4组相比差异有显著性(分别为P=0.012和P=0.023).[结论]T24细胞中存在Robo1和Robo4两种蛋白受体,沉默Robo基因后,Robo1的表达和T24细胞的存活率明显下降.