缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子1α与自噬相关分子的表达及相关性分析

目的 探讨缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子1α (hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)与自噬相关分子Bedin1、LC3B的表达及其相关性.方法 取健康成年SD大鼠髓核组织,分离培养髓核细胞并传代.取第3代髓核细胞行HE染色和Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色鉴定后,随机分为4组.A组细胞于常氧条件下(37℃、5％CO2、20％O2)培养,B组细胞于缺氧条件下(37℃、5％CO2、1％O2)培养,C组细胞转染HIF-1α-小干扰RNA后于缺氧条件下培养,D组细胞加入自噬抑制剂3-MA后于缺氧条件下培养.各组细胞培养8h后,采用Western blot和实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测HIF-1α与自噬相关分子Beclin1、LC3B的表达情况.结果 经分离纯化的第3代大鼠髓核细胞HE染色后细胞质呈淡粉色,细胞核呈蓝黑色;Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色为阳性.Western blot和qRT-PCR检测示,B组HIF-1α、Bedin1和LC3B蛋白及mRNA相对表达量均显著高于A组(P＜0.05),C组均显著低于B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).D组HIF-1α蛋白和mRNA相对表达量与B组比较差异无统计学意义(P＞0.05),Beclin1和LC3B蛋白和mRNA相对表达量均较B组显著降低(P＜0.05).结论 缺氧条件能诱导大鼠髓核细胞中HIF-1α和自噬相关分子Bedin1、LC3B的表达,且HIF-1α与自噬相关分子的表达具有相关性,即HIF-1α下调能降低自噬相关分子的表达,而缺氧条件下自噬水平下调对HIF-1α的表达无明显影响.