热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

[目的] 热刺激预处理诱导热休克蛋白表达,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用.[方法] 热刺激处理诱导热休克蛋白产生,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡,FDA荧光染色计算细胞存活率,相差显微镜分析细胞形态,Hoechst 33258染色分析核形态,琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段,Western blotting检测HSP70表达.[结果] 小脑颗粒神经元在去极化条件(25 mmol/L KCl)下生长良好,复极化(5 mmol/L KCl )后20 h,相差显微镜下神经元胞体缩小,突起断裂.Hoechst 33258染色见核固缩和凋亡小体.琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡的典型生化特征-DNA梯状条带.预先对小脑颗粒神经元进行热刺激处理(44 ℃)不同时间(60 min, 90 min)再复极化,神经元凋亡数明显减少,且随热处理时间延长,保护作用增强.Western blotting 结果:随热刺激(44 ℃)处理时间延长,HSP70表达量逐渐增加.[结论] 热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用.这一保护作用可能涉及HSP70.