小鼠肺炎链球菌脂蛋白SPD_1609多克隆抗体的制备

目的 制备肺炎链球菌脂蛋白SPD_1609的小鼠多克隆抗体.方法 通过PCR扩增肺炎链球菌D39菌株中的spd 1609基因,连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒pGEX-4T-1609.将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3),用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶-SPD_1609(GST-1609)融合蛋白.利用GST亲和层析柱纯化GST-1609融合蛋白,纯化后的融合蛋白用凝血酶(thrombin)外切酶切掉GST标签,进一步通过GST亲和层析得到SPD_1609蛋白.用纯化的不含GST标签的SPD_1609蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA检测抗体的效价,Western blot法检测抗体的特异性.结果 成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1609,经GST亲和层析柱分离纯化后可得到相对分子质量(Mr)35 000的SPD_1609蛋白,蛋白纯度在95％以上.ELISA检测结果显示纯化后的SPD_1609蛋白可诱导小鼠产生特异性免疫应答,免疫小鼠血清抗体的效价达1∶40 960,Western blot法检测显示此多克隆抗体可以特异地识别原核表达和肺炎链球菌细胞内表达的SPD_1609蛋白.结论 成功制备具有较好特异性的SPD_1609蛋白的小鼠多克隆抗体.