牙周膜干细胞来源外泌体的生物学特性分析

目的:采用超速离心,分离牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)来源的外泌体,检测其生物学特性.方法:采用有限稀释法,体外分离、培养人PDLSCs.收集PDLSCs培养上清,采用梯度离心法分离、纯化外泌体.对PDLSCs来源的外泌体进行检测,透射电镜下观察外泌体形态;蛋白质印迹法检测外泌体表面标志CD9、CD63、CD81和TSG101的表达;纳米颗粒跟踪分析(nanosight tracing analysis,NTA)检测PDLSCs来源外泌体的产量及其粒径分布特征.结果:成功分离出PDLSCs来源的外泌体.透射电镜下可见,外泌体为碟形或椭圆形膜性结构,中央电子密度较低.免疫印迹结果显示,分离得到的囊泡表达外泌体特异性标志物CD9、CD63、CD81和TSG101.NTA显示,PDLSCs来源的外泌体浓度为(3.80+0.39)×108颗粒/mL,粒径分布峰值在(119±12.1)nm.结论:采用梯度超速离心法可以得到PDLSCs来源的外泌体,其具有特征性的外泌体膜蛋白成分和形态特征.