电针血清对饥饿条件下肌卫星细胞成肌分化抗原及自噬蛋白Beclin 1表达的影响

目的:观察电针血清对饥饿条件下肌卫星细胞成肌分化抗原(Myod)及自噬相关蛋白Beclin 1表达的影响,探讨电针调控肌卫星细胞增殖及自噬的机制.方法:电针"委中"穴7d后获取并制备不同浓度电针血清.分别以不同浓度(10％、20％、30％)的电针血清及10％胎牛血清对体外培养的原代肌卫星细胞干预12 h及24 h,CCK-8法检测各组细胞不同时间点的增殖情况,确定促进细胞增殖的最佳血清浓度.以无血清培养基培养原代肌卫星细胞12 h后,将细胞随机分为无血清组、10％胎牛血清组、最佳浓度电针血清组,分别加入相应浓度的血清.Western blot法检测不同血清干预12 h和24 h后原代肌卫星细胞中细胞增殖蛋白Myod及自噬蛋白Beclin 1的表达水平.结果:10％电针血清、20％电针血清、30％电针血清干预24 h后,肌卫星细胞增殖能力均优于10％胎牛血清(P<0.01),但3个浓度电针血清之间的肌卫星细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),故取10％电针血清作为最佳浓度.Western blot结果显示:血清干预12 h后,无血清组肌卫星细胞中Myod及Beclin 1表达水平与干预前比较差异无统计学意义(P>0.05),10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平较干预前升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平较干预前降低(P<0.05);与同时点无血清组比较,10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平降低(P<0.01).血清干预24 h后,无血清组Myod及Beclin 1表达水平较12 h时明显降低(P<0.01),10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平较12 h时升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平较12 h时降低(P<0.05);与同时点无血清组比较,10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod及Beclin 1表达水平均升高(P<0.01,P<0.05).结论:饥饿条件下电针血清可改善肌卫星细胞的营养不良环境,抑制其凋亡趋势,促进肌卫星细胞增殖,这种作用可能是通过改善细胞的过度自噬实现的.