优化分枝杆菌重组工程系统构建分枝杆菌突变株筛选方法
Sichuan da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Sichuan University. Medical science edition（2019）
摘要
目的 通过为分枝杆菌重组工程系统(pJV53)加筛选标记,建立一种分枝杆菌突变株的筛选方法.方法 为pJV53加入蔗糖反筛选基因SacB和突变的潮霉素抗性基因hygs,通过潮霉素抗性恢复指示耻垢分枝杆菌(Ms)体内同源重组的成功,为突变株的筛选提供标记;通过蔗糖反筛选挑选脱去质粒的突变株.结果 成功构建重组质粒pJV53-SacB-hygs,筛选出MSMEG_4487 G188A突变株以及利福平耐药的Ms rpoB D516Y和MsrpoB H526Q突变株,并成功将以上突变株脱去质粒.结论 pJV53-SacB-hygs能够有效帮助构建筛选突变株,并对突变株进行脱质粒操作,具有普遍应用价值;结核分枝杆菌rpoB基因D516Y和H526Q的突变与该菌对利福平的耐药有关.
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关键词
Mutant screening,Mycobacterium smegmatis,Plasmid optimization,Plasmid shedding,Rifampin resistance
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