位点特异性PCR鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无药材

建立一种鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无的DNA分子标记鉴别方法.通过测序获得延胡索、齿瓣延胡索、夏天无及其近缘种14种共56个样品的matK,trnG和trnH-psbA序列,利用BioEdit 7.2.2软件比对获得SNP位点,根据变异位点设计AS-PCR鉴别引物,并优化PCR条件,根据特异性条带分别对延胡索、齿瓣延胡索和夏天无进行鉴定.结果 显示模板量(0.6～1 200 ng)和退火温度(42～60℃)对扩增结果影响较小,循环次数对扩增结果影响较大.在循环数为20时,延胡索、齿瓣延胡索和夏天无分别扩出297 bp(matK)、353 bp(trnG)和544 bp(matK)的特异性条带.该研究所建立的方法对延胡索的最低检测限为6 ng,对夏天无的最低检测限为60 ng,齿瓣延胡索低于0.6 ng.该文所建立的位点特异性PCR法能特异性鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无.