盐肤木查尔酮异构酶的克隆、表达及特性分析

黄酮类化合物是药用植物盐肤木Rhus chinensis中主要的功能成分,具有多种药理活性,广泛用于疾病治疗和食品保健等领域.查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI,EC 5.5.1.6)是黄酮类化合物生物合成途径的关键酶.该研究通过RT-PCR及rapid-amplification of cDNA Ends (RACE)技术克隆了盐肤木查尔酮异构酶(命名为RcCHI)全长cDNA序列共1 058bp,包含738bp的开放阅读框,编码245个氨基酸.序列分析表明,RcCHI与其他植物CHI序列相似性在47.1％～71.6％,属于Ⅰ型CHI.通过实时荧光定量PCR检测发现盐肤木不同组织总黄酮含量与RcCHI的mRNA表达呈正相关.进一步构建原核表达载体pGEX-6P-1-RcCHI并转化大肠杆菌BL21,成功获得了重组RcCHI的高效可溶表达.该研究为利用基因工程菌株进行黄酮类化合物的生物合成奠定了基础.