人SCYL1-BP1重组蛋白的原核表达及分离纯化鉴定

前期研究结果发现,SCYL1-BP1具有细胞周期调控功能,同时具有肿瘤抑制因子的特性.目的:采用基因工程技术,构建SCYL1-BP1的大肠杆菌重组表达菌株,以获得足够量的高纯度目的蛋白,为后面进行一系列药理学检测及新药安全性测试奠定基础.方法:利用从人胎脑cDNA文库中克隆得到SCYL1-BP1基因克隆为模板,经PCR扩增,通过酶切位点克隆到新型原核表达载体pET-28b-SUMO上,转化大肠杆菌表达菌BL21( DE3).经IPTG诱导表达,摸索优化表达条件,表达产物经Ni柱进行亲和层析纯化,后再进行SDS-PAGE和Western blot等分析鉴定.结果:成功构建了SCYL1-BP1的原核表达工程菌BL21( DE3 )/pET-28b-SUMO-SCYL1BP1.SDS-PAGE和Western blot检验结果表明,诱导表达的融合蛋白His6-SUMO-SCYL1 BP1的分子量约为65 kDa,主要以可溶的形式存在,且能被His标签抗体和SCYL1 -BP1单克隆抗体特异性识别.结论:原核表达并纯化了人SCYL1 -BP1融合蛋白,为其后续功能研究及性质实验奠定基础.