乌司他丁在脂多糖/尼日利亚菌素诱导的巨噬细胞焦亡中的作用

目的 探讨乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)/尼日利亚菌素(nigericin)诱导的巨噬细胞焦亡的作用.方法 分离小鼠骨髓细胞,应用小鼠巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)将其诱导分化为巨噬细胞,并分为对照组、UTI组、模型组和模型+UTI组4组.UTI组和模型+UTI组在建模前给予1000U/ml UTI预处理,其余两组给予等量PBS;模型组和模型+UTI组先用LPS 100ng/ml刺激培养4h,再加入10μmol/L尼日利亚菌素继续刺激2h;对照组及UTI组在此期间仅给予等体积PBS.采用噻唑蓝(MTT)法评价各组细胞活力;应用分光光度法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;Western blotting检测半胱天冬酶-1(caspase-1)及Gasdermin D蛋白(GSDMD)的表达变化;应用RT-qPCR检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18 mRNA水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平.结果 与模型组比较,UTI预处理明显提高了LPS/尼日利亚菌素刺激后的巨噬细胞存活率(73.40％vs.86.30％,P<0.05),降低了LDH释放率(22.45％vs.14.80％,P<0.05),caspase-1和GSDMD片段化水平,IL-1β、IL-18 mRNA水平及蛋白分泌量,以及细胞上清TNF-α(311.30±33.02pg/mlvs.206.10±28.84pg/ml,P<0.05)和IL-6水平(212.60±32.72pg/mlvs.143.77±6.36pg/ml,P<0.05).结论 乌司他丁可抑制巨噬细胞焦亡,降低炎症反应.