Les plaquettes humaines marquées à différentes densités de biotine : une approche prometteuse pour la mesure simultanée de la survie de plaquettes in vivo dans des études cliniques

Contexte La biotine (Biot) est une alternative aux sondes radioactives pour tracer les cellules sanguines. Elle permet de suivre simultanement in vivo plusieurs populations de cellules marquees a differentes densites de Biot. Une seule etude decrit le suivi d’une population de Biot-plaquettes (PLTs) chez l’homme (Stohlawetz, 1999). Objectif Il s’agit de marquer des PLTs humaines avec differents niveaux de Biot afin de determiner si la biotinylation affecte leurs fonctions. C’est une etude preliminaire pour explorer la faisabilite de produire des Biot-PLT multi-marquees pour des etudes cliniques. Methode Les PLTs en Tyrodeu0027s albumine (TA) sont incubees avec de la sulfo-NHS-Biot (0, 4,5, 45 et 180 μM), lavees 2 fois et resuspendues en TA/PPPcit (v/v). La densite de Biot est controlee en cytometrie en flux (CF) avec la streptavidine-PE et les fonctions des PLTs evaluees sur les criteres de secretion, integrite des glycoproteines (GP) et agregation. Resultats Les populations de Biot-PLTs sont distinguees en CF. L’externalisation de la P-selectine apres activation au TRAP est stable de 0 a 45 μM de Biot et un peu diminuee pour 180 μM. L’expression de GPIb et GPIIbIIIa est normale pour toutes les Biot-PLTs. L’agregabilite a l’acide arachidonique (AA) est preservee pour toutes les Biot-PLTs. La Biot diminue la reponse a l’ADP et au collagene de facon dose dependante avec une agregation des Biot180-PLTs abolie avec l’ADP ( Tableau 1 ). Conclusion Les principales fonctions plaquettaires : secretion, integrite des GP et agregation en reponse a l’agoniste fort l’AA, sont pleinement conservees pour toutes les densites de Biot. Mais la biotinylation affecte la reponse a l’ADP et au collagene. Le multi-marquage a la Biot serait approprie pour reperer les PLTs lors d’etudes cliniques pourvues que des concentrations de Biot