La réduction de l’expression du gène Men1 augmente la prolifération des cellules épithéliales de la thyroïde murine

Des travaux anterieurs dans le modele murin ont revele que la menine controlait la croissance de la glande thyroide. Dans le but de rechercher si la menine exerce un controle sur la proliferation cellulaire, nous avons examine le niveau d’expression de trois lignees de thyrocytes de rat (FRT, FRTL5 et PCCL 3) puis nous avons reduit le niveau d’expression du gene Men1  grâce a une approche d’ARN interferents et analyse les consequences de la reduction de l’expression de Men1  sur la proliferation cellulaire. L’expression de la menine a ete analysee par Western-blot en utilisant un Ac anti-menine (dilution : 1/10 000). Nous avons mis en evidence un doublet de 68–70 kDa correspondant aux formes phosphorylees et non-phosphorylees. L’homogenat cellulaire a ete centrifuge a 100 000 g/30 min, une bande de 68 kDa a ete detectee dans la fraction particulaire mais pas dans la fraction soluble suggerant une localisation nucleaire. L’intensite du signal dans la lignee dedifferenciee FRT est deux fois plus elevee que dans les lignees differenciees PCCL3 et FRTL5 suggerant une eventuelle correlation entre le contenu en menine et l’etat de differenciation. A partir de conditions optimales de transfection de siRNA, (4 μL Dharmafect/10 000 cellules) pendant une duree de 48 a 72 h, nous avons observe une perte d’expression du gene Men1  de 80 % dans les lignees FRTL5 et PCCL3. Cette reduction conduit a une augmentation de la proliferation de 40 a 60 % determinee par le test MTT et le comptage des cellules. En conclusion, la menine agit comme un regulateur negatif de la proliferation cellulaire thyroidienne.