IκBα低表达转基因小鼠的建立及其表达调控

目的 构建IκBα低表达转基因小鼠并分析IκBα的表达调控机制,为体内考察IκBα基因的整体效应提供基础. 方法 构建转基因构件RV-IκBα-Loxp -Mut -Neo载体,将线性化载体电转入胚胎干细胞, Southern blot筛选阳性克隆,再将阳性克隆进行显微囊胚注射,获得嵌合鼠,嵌合鼠与C57BL/6N交配获得F1代杂合型IκBα knockin小鼠. 纯合型IκBα knockin 小鼠与Ella Cre 鼠杂交,其后代自交获得删除Loxp 位点区间的IκBα knockout纯合型小鼠,PCR分别鉴定基因型. Western blot 检测转基因小鼠各器官IκBα的表达情况,以正常野生C57/B6小鼠为对照. 结果 经PCR方法鉴定得到IκBα knockin和IκBα knockout 转基因小鼠;Western blot结果显示与野生型小鼠相比,F2代IκBα knockin纯合型小鼠的脾、胸腺、肺等器官中IκBα的表达量降低,在IκBα knockin杂合型小鼠中,除上述器官外,皮肤、鼻咽、胃等器官中突变型染色单体IκBα的表达量也比野生型低;F2代IκBα knockout小鼠多数器官中IκBα的表达量低于正常野生C57/B6小鼠. 结论 成功建立了在多数器官低表达IκBa的转基因鼠;其中κB位点可能参与调控胸腺、脾、肺、鼻咽、皮肤、胃等器官中IκBa的表达,而其上游3 kb调控序列可能参与调控肝、鼻咽、胃、胰腺、小肠等器官中IκBa的表达.