CD11b-BFP融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

目的:构建并表达巨噬细胞分化抗原1(Mac-1)的α链CD11b与蓝色荧光蛋白(BFP)的融合蛋白CD11b-BFP,为进一步直视研究Mac-1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件.方法:首先将CD11b的全长cDNA进行酶切并获得2个片段,将其中含有终止密码的片段作为模板,通过设计引物进行PCR,获得不含有终止密码的该片段,然后与另一片段进行连接,形成不含有终止密码的Mac-1全长cDNA, 将其插入到表达载体pEBFP-N1中,构建完成CD11b-BFP融合基因,最后将其转染至U937细胞株中,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测Mac-1的表达及其黏附活性来进行鉴定.结果:经酶切鉴定,pCD11b-BFP构建完全正确,转染U937细胞株后,可见CD11b-BFP融合蛋白发出的蓝色荧光.结论:构建完成CD11b-BFP融合基因并在U937细胞株中进行表达.