微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

为了对微小隐孢子虫（C ． p arv um）类钙调蛋白（CM L ）基因进行原核表达，分析重组表达蛋白的反应原性。以 C ．parvum卵囊cDNA为模板，用PCR方法扩增得到C ．parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18‐T ，获得重组质粒pMD‐CML ，经限制性内切酶 BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切后，连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX‐6p‐1上，构建重组表达质粒，转化到大肠埃希菌BL21（DE3）中进行诱导表达。利用GST 亲和树脂法纯化重组表达蛋白，对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明，成功构建了重组原核表达质粒pGEX‐CML ，重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51 ku的重组蛋白rCM L ，纯化的蛋白rCM L能与感染兔隐孢子虫（C ．cuniculus）的兔血清发生特异性反应，具有很好的反应原性。