微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
Progress in Veterinary Medicine(2015)
Abstract
为了对微小隐孢子虫(C . p arv um)类钙调蛋白(CM L )基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以 C .parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C .parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18‐T ,获得重组质粒pMD‐CML ,经限制性内切酶 BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX‐6p‐1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST 亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX‐CML ,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51 ku的重组蛋白rCM L ,纯化的蛋白rCM L能与感染兔隐孢子虫(C .cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
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Key words
prokaryotic expression,protein,gene,calmodulin-like
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