p38MAPK通路调控BMP9诱导hPDLSCs成骨分化的体外研究

目的:检测骨形成发生蛋白9 (bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38 MAPK通路在该成骨分化中的作用.方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)感染hPDLSCs后,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定与染色、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、钙盐沉积等方法,分别检测ALP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达及钙盐沉积量,评价BMP9诱骨分化的能力.在Ad-BMP9感染hPDLSCs 36 h后,检测BMP9作用hPDLSCs后对p38及MKK3/6磷酸化(p-p38,p-MKK3/6)的影响,以及p38 MAPK通路抑制剂SB203580预处理后BMP9-p38-MAPK通路对hPDLSCs成骨分化的影响.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在Ad-BMP9作用下,ALP活性、OPN和OCN的表达均显著高于对照组(P＜0.01),ALP染色与钙盐沉积结果与之吻合.Western印迹法检测发现,BMP9可增强p-p38、p-MKK3/6的表达.加入p38MAPK通路抑制剂后,ALP、及OPN、OCN的表达均显著降低(P＜0.01),钙盐沉积、基质矿化也显著减弱.结论:在hPDLSCs的分化过程中,BMP9对其具有诱骨分化能力.MKK3/6-p38 MAPK通路参与了该成骨分化过程且具有正向调节作用.