携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定

利用细菌人工染色体技术将串联的HIV-1 gp160、gag和protease基因以及表达元件插入1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)内部反向重复序列区,以获得携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗.首先将HIV-1 gp160 (B型和C型)、gag和protease基因串联克隆入pcDNA3获得重组质粒pcDNA/gBgp和pcDNA/gCgp,重组质粒转染293FT细胞,Western blotting检测HIV抗原表达.继而将pcDNA/gBgp和pcDNA/gCgp中包括HIV-1抗原基因和表达元件的表达框克隆入pKO5/BN获得重组穿梭质粒pKO5/BN/gBgp和pKO5/BN/gCgp,穿梭质粒电转含BAC-HSV的大肠杆菌,筛选重组菌,提取重组DNA并转染Vero细胞,挑取病毒蚀斑纯化重组病毒,Southern blotting鉴定重组病毒DNA,Western blotting检测重组病毒感染细胞中HIV抗原表达,并分析病毒的增殖特性.结果表明,Western blotting在pcDNA/gBgp和pcDNA/gCgp转染的293FT细胞中检测到表达的gp160和gag蛋白.pKO5/BN/gBgp和pKO5/BN/gCgp分别电转获得重组菌,并从重组DNA转染的Vero细胞中纯化获得重组HSV,Southern blotting检测表明重组HSV基因组发生特异性重组,重组病毒感染细胞中检测到gp120和gp41,且重组HSV保留了在哺乳动物细胞中的复制能力.本研究获得携载HIV-1 gp160、gag和protease基因的重组HSV,并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力,可作为HIV-1复制型病毒载体疫苗.