高脂对大鼠肝星状细胞纤维化的影响

目的 研究高脂对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)、α-平滑肌肌动蛋白(o-SMA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,探讨高脂对肝纤维化影响的机制.方法 体外培养HSC-T6,300μmol/L棕榈酸(PA)处理HSC-T6 24h,对照组采用等量牛血清白蛋白(BSA)处理HSC-T6 24 h,Western blot检测α-SMA、MMP-2的表达;剂量效应组分别用浓度为0 μ mol/L、100 μ mol/L、200 μ mol/L、300 μ mol/L、500μmol/L、1 000 μ mol/L的PA处理HSC-T6 24h;时间效应组用浓度为300μmol/L的PA分别处理HSC-T6 0h、4h、8h、12h、24 h、48 h,对照组采用等量BSA代替PA,Western blot检测HMGB1、α-SMA、MMP-2的表达;浓度为0 ng/ml、50 ng/ml、1oo ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml的重组人HMGB1 (rHMGB1)处理HSC-T6 48h,对照组采用等量磷酸盐缓冲液代替PA,Westem blot检测α-SMA、MMP-2的表达;PA组采用浓度为300 μ mol/L的PA处理HSC-T6 24 h,PA+HMGB 1-siRNA组在下调HSC-T6细胞内HMGB1后加入300μmol/L的PA处理24h,空白对照组采用等量BSA代替PA,Westernblot检测HMGB1、α-SMA、MMP-2的表达.计量资料采用单因素方差分析,两两比较采用t检验.结果 (1)300μmol/L PA处理HSC-T6 24h,α-SMA、MMP-2的表达较0h明显增加(P＜0.05);(2)不同浓度PA处理HSC-T6 24h,HMGB1、MMP-2的表达较未处理组(0μmol/L)明显增加(P＜0.01),α-SMA的表达在PA浓度为200 μ mol/L、300μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L时出现明显增加妒＜ 0.01);300 μ mol/L PA处理不同时间,HMGB1、α-SMA和MMP-2呈现不同程度的上升,并且在16 h、24 h、48 h较0h出现显著性增加(P＜0.01);(3) 1oo ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml rHMGB1处理HSC-T6 48 h,α-SMA、MMP-2的表达较未处理组(0ng/ml)明显增加(P＜ 0.05);(4)与PA组相比,PA+HMGB1-siRNA处理HSC-T6 24 h,HMGB1、α-SMA和MMP-2的表达明显下降(P＜ 0.05).结论 高脂可以通过上调HSC-T6中HMGB1的表达来促进α-SMA、MMP-2的表达,从而导致肝纤维化的发生.