靶向Hiwi基因的shRNA表达载体的干扰效果评价

目的 评价靶向Hiwi基因的shRNA表达载体的干扰效果.方法 通过构建靶向Hiwi基因的短发夹RNA(shout-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263,并以pGenesil-2-control为阴性对照,转染膀胱癌T24细胞,从mRNA和蛋白水平观察3种干扰载体的干扰效率.结果 pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263组膀胱癌T24细胞Hiwi mRNA与GAPDH灰度比值较Normal control组Hiwi mRNA与GAPDH灰度比值显著降低(P<0.01),pGenesil-2-control、pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263的干扰效率分别为5.7%、100%和100%.pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263组膀胱癌T24细胞Hwi蛋白与GAPDH灰度比值较Normal control组Hiwi蛋白与GAPDH灰度比值明显著降低(P<0.01),pGenesil-2-control、pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263的干扰效率分别为3.2%、74.2%和64.5%.结论 pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263表达载体沉默膀胱癌T24细胞中Hiwi基因表达,干扰效率较高,为今后通过RNAi技术抑制Hiwi基因表达,从基因与蛋白质水平探索Hiwi基因在干细胞及肿瘤中的作用打下基础.