高效液相色谱-荧光检测法在小儿尿蝶呤分析中的新应用

目的:建立高效液相色谱-荧光法测定小儿尿液中新蝶呤(N)和生物蝶呤(B)含量,利用多波长发射光光谱比对及3D数据拟合,准确判断色谱图上各色谱峰的性质和归属。方法:选用 COSMOSIL 5C_(18)-AR-Ⅱ色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水(8:92)为流动相,用荧光检测器检测。结果:新蝶呤在0.0625～16μg·mL~(-1)范围内、生物蝶呤在0.0675～17.28μg·mL~(-1)范围内,峰面积与浓度具有良好的线性关系。新蝶呤和生物蝶呤的最低检测限分别为0.0625μg·mL~(-1)和0.0675μg·mL~(-1)。两者测定的日间、日内精密度符合测定要求,日内测定 RSD<1%,日间测定 RSD<5%。回收率均在93%～102%之间。样品处理后在室温或4℃条件下稳定性较好。新蝶呤和生物蝶呤的最大发射光波长均在450nm,通过发射光光谱比对、3D 数据拟合可以准确判断生物蝶呤和新蝶呤峰。结论:本方法灵敏、准确、快速,多波长发射光谱比对可以有效判断色谱峰的归属和纯度,为临床诊断提供可靠的试验数据。