马来丝虫肌球蛋白基因序列及编码产物预测

目的 克隆周期型马来丝虫肌球蛋白(BmMyosin)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测.方法 依据公布的BmMyosin基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的 编码基因.扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E. coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmMyosin,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法 对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RT-PCR扩增出一条约1 292 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果 与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为98.45%.经表位预测分析,BmMyosin的B细胞表位可能在287～300位、339～350位和416～422位氨基酸区域.结论 成功构建了周期型马来丝虫肌球蛋白重组质粒pGEM-T克隆载体,对其编码产物进行B细胞表位预测.为蛋白质特性分析及免疫学研究提供基础依据.