流式细胞术分析ITP巨核细胞分化发育异常的初步研究

目的 建立流式细胞术(FCM)分析人骨髓巨核细胞的新方法 ,用于特发性血小板减少性紫癜(ITP)巨核细胞分化发育异常的初步研究.方法 对15例正常骨髓供者(对照组)、37例ITP患者及11例继发性血小板减少症(ST)患者进行骨髓巨核细胞绝对计数;采用Percoll密度梯度分离法富集骨髓巨核细胞,经透膜处理后,用荧光素标记的单克隆抗体标记巨核细胞糖蛋白IIb/IIIa(CD41a)、血管性血友病因子(vWF)、P-选择素(CD62P),用碘化丙锭(PI)标记巨核细胞DNA,流式细胞术分析巨核细胞倍体分布和糖蛋白表达水平.结果 对照、ITP和 ST三组之间比较,骨髓巨核细胞绝对数量无差异(P>0.05).富集后的骨髓标本,巨核细胞比例显著增高,可比富集前高17倍,而且DNA倍体(N)分布清晰,易于FCM分析设门和计算.与对照组比较,ITP患者巨核细胞DNA倍体分布未见明显改变,但CD41a表达量在2N、4N、8N、16N、32N、64N显著高于对照组(P＜0.01);vWF表达量在各倍体巨核细胞均减低,32N时减低更显著(P＜0.05);CD62P表达量在ITP组与对照和ST组间差异无显著性(P>0.05).结论 在ITP患者骨髓巨核细胞的分化发育过程中,其数量和DNA倍体增加未受影响,但其功能蛋白合成出现显著变化.在不同倍体巨核细胞中,CD41a表达显著增高;而vWF呈现表达下降趋势,尤其是高倍体(32N)时减低更为显著;P-选择素表达水平稳定.多色流式细胞术分析骨髓巨核细胞为ITP的发病机制及其相关研究提供了新手段.