铅对原代培养海马细胞形态及酶活力的影响

目的观察铅对原代培养海马神经元形态及酶活力的影响。方法原代培养乳大鼠海马神经元,经不同浓度醋酸铅(50、100、200μg/ml)作用1~8 d,用活细胞倒置相差显微镜、HE染色和尼氏体染色观察细胞形态改变;光密度法检测细胞外液中的乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和胆碱酯酶(cholesterase,CHE)活力;激光扫描共聚焦显微镜定量分析神经元胞浆中游离Ca2+的平均荧光强度。结果形态学观察发现,低醋酸铅(50、100μg/ml)组海马神经元表面粗糙,胞体变小,突起细小,细胞间网络疏松,胞体与胞浆之间界限逐渐模糊不清,核仁不清晰;200μg/ml组,神经元数量减少,细胞之间聚集呈团簇状,可见细胞膜损伤破裂,即神经元解体坏死。HE染色观察低浓度醋酸铅作用24 h后,可见散在单个细胞核回缩,胞浆、突起着色不均,甚至有的出现染色质凝集、核边移,但核膜完整;高浓度醋酸铅则使细胞质空泡变性,突起减少,核边移呈半月形,甚至细胞出现解体坏死,细胞之间聚集成团。尼氏体染色显示醋酸铅能使海马神经元的尼氏体减少,着色浅淡,且有剂量依赖关系。另外,醋酸铅作用于海马神经元24 h后,培养上清中LDH释放增加(P<0.01),CHE活力明显下降(P<0.01)。激光共聚焦显微镜检测结果显示,随着醋酸铅浓度的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照组(P<0.01),并有剂量?反应关系。结论原代培养的海马神经元随着醋酸铅浓度的加大,呈现不同程度的损伤。