通过设计发夹RNA抑制HIV病毒NEF基因表达的实验研究

目的实验研究shRNA能否抑制宿主细胞Hele细胞中NEF基因的表达。方法给HIV病毒宿主细胞Hele细胞加入预先设计好的4对shRNA,同时设置对照组,提取细胞总RNA和细胞总蛋白,设计NEF和GAPDH的引物,利用SYBR Green实时荧光定量PCR检测NEF的基因水平,利用western blotting检测NEF的蛋白水平。结果定量PCR和Western-blot方法检测显示,NEF-miRNA-1、NEF-miRNA-2、NEF-miRNA-3、NEF-miRNA-4干扰质粒对靶基因mR-NA表达都有抑制作用,其中NEF-miRNA-3干扰质粒抑制作用最显,抑制率达87%。结论可以通过设计shRNA去抑制HIV病毒的复制。