靶向EBV阳性鼻咽癌小环质粒的构建及表达

目的 构建表达人IFNγ的靶向小环质粒及其对照质粒,并观察其在EBV阳性鼻咽癌细胞中的靶向表达.方法 采用分子克隆的方法构建中间靶向质粒pSP72-oriP-IFNγ-polyA(pSP72-oriP-IFNγ)和对照质粒pSP72-CMV-IFNγ-polyA(pSP72-CMV-IFNγ).对其分别做双酶切,定向克隆于母环质粒p2ΦC31中,构建成p2ΦC31-oriP-IFNγ和p2ΦC31-CMV-IFNγ质粒.转化TOP10细菌后,通过介导分子内重组,降解原核骨架,获取只含目的基因表达盒的靶向小环质粒mc-oriP-IFNγ和对照质粒mc-CMV-IFNγ.将小环质粒分别转染EBV阴性细胞和EBV阳性细胞,采用ELISA方法定量检测小环质粒介导目的基因的靶向表达.结果 构建了靶向性母环质粒p2ΦC31-oriP-IFNγ及其对照质粒p2ΦC31-CMV-IFNγ,并诱导纯化出相应的靶向性小环质粒mc-oriP-IFNγ及其对照质粒mc-CMV-IFNγ,通过转染真核细胞,检测出靶向性小环质粒能够介导IFNγ在EBV阳性鼻咽癌细胞中特异表达.结论 成功构建了靶向性小环质粒mc-oriP-IFNγ,并证明其能够特异性地介导目的基因在EBV阳性鼻咽癌细胞中表达,而在EBV阴性鼻咽癌细胞及正常细胞中不表达.