抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达

目的 构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达.方法 采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒.采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dot blot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析.结果 成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列；抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确；表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子；免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区.结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础.