定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的建立定量检测肝细胞生成素Cn(HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法。方法利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定。利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测。通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度。以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线。结果得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab_65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_11-11-12和Ab_12-27-23。8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性最好。经抗体配对检测证实最佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12。包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab_4-8-12的最适工作浓度为2.5μg/ml,最适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0～60 ng/ml。结论制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法。