多拷贝重组HBsAg质粒的构建及在毕赤酵母中的高效表达

目的 通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株.方法 通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达盒(5'AOX-HBsAg-TT)重复导人载体,构建多拷贝数表达质粒.通过电转化、15 L规模发酵和纯化,获得纯化HBsAS颗粒,并对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数间的关系进行分析.结果 多拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDS-PAGE、Western blot检测,显示出良好的特异性,电镜观察证明表达产物能够自发装配成22 nm 类病毒颗粒(VLP),其表达量与拷贝数呈正相关,拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响,HBsAg制备的免疫原能有效刺激小鼠产生保护性抗体.结论 含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母HBsAg表达量.