阈值法检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量方法的建立及初步验证

目的 建立一种阈值法(threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法.方法 取人用狂犬病疫苗进行DNA抽提后,与内控品经高温变性、冰浴后,37℃水浴1h,加入生物素标记的单链DNA结合蛋白(single stranded binding protein,SSB)和尿素酶标记的抗单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)的单抗,与变性的宿主细胞DNA结合形成复合物,经过滤、洗涤后,将复合物吸附于硝酸纤维素膜上,置Threshold仪器样品检测池中,检测DNA含量.对建立的阈值法测定人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法进行线性范围、准确性及精密度验证.结果 该方法的最低检测限为3 pg/500μl,线性范围为3～ 200 pg/500μl,DNA内控品浓度的对数与相应的检测信号值的对数呈良好的线性关系(R2=0.98);该方法检测不同企业疫苗样品的回收率为99％～ 124％,变异系数为8.5％,加入内控品后再抽提,不同企业疫苗样品的回收率为48％～128％,变异系数为32.9％;同1批疫苗重复10次的检测结果的CV值为7.8％,同1批疫苗不同时间检测结果的CV值为11.8％.结论 阈值法可检测人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主DNA残留量,该方法操作简便,灵敏度好,准确性及精密度高,对人用狂犬病疫苗生产和质量控制具有较好的指导意义.