蠕形螨ISSR-PCR的反应体系优化及引物筛选

目的 以蠕形螨的DNA为模板,对蠕形螨简单重复序列锚定PCR (ISSR-PCR)反应体系优化并对ISSR引物进行筛选,为ISSR分析奠定基础.方法 用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用基因组DNA提取试剂盒提取山羊蠕形螨DNA,并以此为模板,以(CA)8RG(R为1分子的嘧啶)为引物,利用正交实验法,从Mg2+浓度、引物用量、dNTPs、DNA模板用量和TaqDNA聚合酶以及退火温度对蠕形螨ISSR-PCR反应体系进行优化,并以优化的反应体系筛选ISSR-PCR的引物.结果 ISSR-PCR 25 μL最佳反应体系包括:0.4 mmol/L Mg2+、30 pmol引物、30～60 ng模板DNA、2u Taq酶,最佳退火温度为49℃、循环35次.筛选出10条条带清晰、多态性好、重复性高的引物.结论 筛选出蠕形螨ISSR-PCR最佳反应体系和理想的引物,为蠕形螨的分子生物学研究奠定了基础.