不同剂量柚皮素介导的促氧化作用及其对 CNE2细胞生长的调控
Journal of Medical Postgraduates(2014)
Abstract
目的:柚皮素重要的生理活性使其具有广泛的开发应用前景。文中探讨不同剂量柚皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制。方法 MTT法检测不同剂量柚皮素(0、0.005、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL)作用CNE2细胞不同时间(24、48、72 h)对其细胞生长率的影响;流式细胞仪检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04 mg/mL )作用 CNE2细胞48 h 对其细胞周期的影响;采用 Hochest 33258荧光染色观察不同剂量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡形态的变化;采用Annexin V-FITC流式细胞术检测不同剂量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡率的影响;采用2,7-二氯乙酰乙酸(2,7-dichloro fluorescein diacetate , DCFH-DA)荧光探针检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48h对其细胞内活性氧簇(reactive oxygen spe-cies, ROS)的变化;采用实时荧光定量PCR法( real-tmie fluorescence quantitative PCR , qPCR)检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平的变化。结果与对照组相比,0.02、0.04 mg/mL柚皮素能引发CNE2细胞内ROS含量低水平升高,ROS的MFI分别为5186±183.50、5508±155.37,差异有统计学意义(P<0.05),由此诱导细胞增殖调控基因C-fos表达,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),加速细胞周期运转,促进CNE2细胞分裂增殖;而0.2、0.4 mg/mL柚皮素则能引发ROS大量产生,ROS的MFI分别为10758±179.82、11241±114.45,差异有统计学意义(P<0.01),由此诱导促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表达,促进CNE2细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.01),有效抑制CNE2细胞增殖。结论在0.005~0.8 mg/mL剂量范围,柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用,相对较低剂量体现为一定的促癌活性,相对较高剂量则体现为强烈的抑癌活性。
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Key words
nasopharyngeal carcinoma cne2 cells,nasopharyngeal carcinoma,naringenin,prooxidant activities
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