8种天然药物与硼替佐米对HBsAg抑制作用及蛋白质组学分析

目的:比较硼替佐米和几种天然药物体外对HBV的抑制作用,并探索硼替佐米抑制HBV的分子机制.方法:采用MTT法观察不同浓度药物对HBV-Tg小鼠原代肝细胞的毒性,确定最大无毒浓度,用ELISA方法检测培养24h后细胞上清中HBsAg的变化,比较不同药物对HBsAg的抑制率.经1 μmol/L硼替佐米处理原代肝细胞24h后,提取蛋白质,采用双向凝胶电泳分离总蛋白,得到差异表达的蛋白质点进行分析比对.以RT-PCR及West blot验证选定的差异蛋白,分析其与HBV抑制作用的关系.结果:在8种天然药物中以扁蒴藤素对HBV作用最强,IC50为0.43 μmoL/L,EGCG的IC5o是24.9 μmol/L,且安全性较好.硼替佐米作用原代肝细胞蛋白质组分析发现了21个差异斑点,其中包括HSP60异构体(gi/26353954).RT-PCR检测发现经硼替佐米作用后HSP60、HSP90表达下调,HSP70表达上调,而West blot鉴定HSP60变化不大.但是经EGCG作用后HSP90表达的下调与对HBsAg的抑制是一致的.结论:调节宿主细胞的蛋白质降解与折叠将有利于寻找新型抗HBV药物.