ROBO4过表达抑制高糖条件下人肾小球内皮细胞高通透性的体外研究

目的 探讨ROBO4基因过表达对高糖诱导的人肾小球内皮细胞(HRGEC)高通透性的影响.方法 体外培养HRGEC,以携带ROBO4基因的重组慢病毒载体感染HRGEC获得过表达ROBO4的HRGEC.将细胞分为低糖培养组和高糖培养组,采用Western blotting检测ROBO4和ARF6蛋白的表达,异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-Dextran)法检测HRGEC的通透性,CCK-8法测定细胞存活率.结果 慢病毒在HRGEC中的72h转染率达80％,与空载体组相比ROBO4转染组HRGEC细胞的ROBO4蛋白明显过表达(P＜0.05),CCK8检测显示慢病毒转染后HRGEC细胞活性不受影响.与低糖组相比,高糖组ROBO4蛋白表达在12h时点明显增高(P＜0.05),24h回落,72h下降最为明显(P＜0.05),而ARF6蛋白的表达在12h开始明显升高,72h时升高最为明显(P＜0.05).高糖组FITC-Dextran层HRGEC屏障的通透性在24h开始逐步升高,72h时升高最为明显(P＜0.05);与空载体组相比,ROBO4过表达可显著抑制高糖条件下ARF6的表达及降低体外单层HRGEC屏障的FITC-Dextran通透性.结论 ROBO4过表达可降低高糖条件下HRGEC的通透性,激活ROBO4有望成为治疗糖尿病肾病内皮功能障碍的新方向.