实时动态活细胞成像系统在单克隆筛选和克隆形成能力检测中的应用

目的 利用IncuCyte ZOOM系统筛选肿瘤细胞单克隆和克隆形成能力检测.方法 采用差速消化与差速贴壁分离培养原代肿瘤细胞;在有限稀释法基础上,采用IncuCyteZOOM系统的实时动态追踪和全孔成像技术对肿瘤细胞进行单克隆筛选及克隆形成能力分析.结果 从30例肿瘤组织中培养6株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-02至07),进一步从5株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-03至07)中成功筛选出89个持续增殖的单克隆,其中67个克隆扩增培养并冻存;并且通过时序图准确有效地排除了18个不能持续增殖的单克隆和28个由2个及以上细胞组成的多克隆.2例单克隆株(TJ3ZX-06-B11,TJ3ZX-07-H11)克隆形成能力分析表明,14 d时平皿方法的克隆形成率(35.17％,13.17％)高于IncuCyte ZOOM 96孔全孔成像(23.13％,5.51％),且差异有统计学意义(P＜0.05);延长至21d时全孔成像的克隆形成率为(35.63％,13.22％),与平皿方法比较无统计学差异.结论 IncuCyte ZOOM系统能够简便、准确、省时省力地实现单克隆细胞筛选和克隆形成率检测.