类表皮生长因子域7基因shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定
The Chinese Journal of Clinical Pharmacology（2017）
摘要
目的 用基因重组技术构建LV3-人类EGFL7基因的小发卡RNA(LV3-hEGFL7-shRNA)慢病毒表达载体.方法 设计靶向hEGFL7-shRNA序列,建立LV3-hEGFL7-shRNA,在慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+ Puro中放置hEGFL7-shRNA基因片段,DNA测序以及酶切的方式进行检测hEGFL7片段,转染293T细胞后对上清液进行浓缩,最后在对病毒滴度进行检测.结果 EGFL7-shRNA核苷酸链有正确的插入顺序,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×108 TU·mL-1.结论 hEGFL7-shRNA慢病毒表达载体构建成功,鉴定可满足试验需求.
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