核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响

目的 构建小鼠核糖体蛋白S3a(RPS3a)特异性RNA干扰重组慢病毒载体(Lenti-shmRPS3a),分析其对细胞凋亡的影响.方法 设计针对小鼠RPS3a mRNA的4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接人慢病毒载体系统pLLU2G-eGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度.病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响.结果 PCR和测序证明成功构建出LentishmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为(6～9)×107 TU/mL;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64％,蛋白质印迹法证明RPS3a蛋白表达水平降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a的细胞凋亡率较对照组升高(P＜0.05).结论 表达小鼠RPS3a shRNA的慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡.