食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1的表达及其作用机制

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中微RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)的表达及其可能的作用机制.方法:分别应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测55例食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁组织中miRNA-1、LASP1 (LIM and SH3 domain protein 1)mRNA和LASP1蛋白的表达水平.应用生物信息学软件预测miRNA-1的潜在靶基因.将含有LASP1基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)的重组双荧光素酶报告载体psiCHECK-2-LASP1与miRNA-1模拟物(miRNA-1-mimic)共转染至食管癌Eca109细胞,通过双荧光素酶报告系统验证miRNA-1的靶基因.将miRNA-1 mimic或miRNA-1抑制物(miRNA-1-inhibitor)分别转染至Eca109细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测细胞中miRNA-1的表达水平,应用蛋白质印迹法检测细胞中LASP1蛋白的表达水平.结果:食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1的表达水平低于相应的癌旁组织(P＜0.01),而LASP1 mRNA和蛋白的表达水平高于相应的癌旁组织(P值均＜ 0.05).并且,miRNA-1和LASP1的表达与食管癌患者的淋巴结转移、TNM分期及组织学分级等有关(P值均＜0.05),食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1与LASP1蛋白表达水平呈负相关(r=-0.45,P＜0.05).生物信息学软件预测LASP1是miRNA-1的潜在靶基因,双荧光素酶报告系统验证了miRNA-1可与LA5P1基因的3'-UTR特异性结合.转染miRNA-1 mimic后,Eca109细胞中miRNA-1的表达水平上调(P＜0.01),LASP1蛋白的表达水平下调(P＜0.05);而转染miRNA-1 inhibitor后,Eca109细胞中miRNA-1的表达水平下调(P＜0.05),LASP1蛋白的表达水平则上调(P＜0.05).结论:食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1低表达,其机制可能与调控靶基因LASP1的表达有关.