布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5-90诱导巨噬细胞凋亡线粒体途径相关因子的表达比较

目的 比较布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后其凋亡相关因子的转录和表达. 方法 建立16M、M5-90侵染RAW264.7模型,采用CFU计数法比较16M、M5-90侵染RAW264.7 4、8、12、24 h后的胞内生存情况;采用qRT-PCR检测AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl基因转录水平的变化;采用ELISA检测TNF-α和Cyt C在细胞内的表达;采用激光共聚焦检测Cyt C在细胞内共定位表达情况. 结果 布鲁氏菌16M在侵染后4h～24 h胞内CFU呈增多趋势,而M5-90 CFU先增多后减少.qRT-PCR显示AIF基因的转录水平在侵染后4h～24 h内呈上升趋势,且M5-90侵染组与16M侵染组比较差异无统计学意义(P＞0.05);由M5-90侵染诱导的Apaf-1基因转录水平与16M侵染组比较有统计学意义(P＜0.05);Bcl-xl的转录量随着侵染时间增长而不断增加,且16M诱导组与M5-90组比较差异无统计学意义(P＞0.05);M5-90侵染组Bax和Bcl-2水平与16M组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05);M5-90侵染组Bax/Bcl2比值与16M侵染组比较差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA分析显示TNF-α、Cyt C分泌量随着时间增长而增加,且M5-90诱导组与16M组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).激光共聚焦显示Cyt C定位在RAW264.7内,属于胞浆表达,且M5-90诱导的表达量与16M组比较差异无统计学意义(P＞0.05),并随感染时间的延长不断增加. 结论 布鲁氏菌疫苗株M5-90侵染RAW264.7 4 h～24 h内,凋亡相关因子Cyt C、AIF、Bax/Bcl-2、Apaf-1的表达量高于强毒株16M侵染组,而Bcl-xl则相反,表明在此侵染阶段M5-90具有更强的促细胞凋亡作用.