水产品中常见5种致病菌的多重PCR-DHPLC快速检测方法的建立

目的 建立水产品中5种常见致病菌的快速高分辨检测手段,提高检测的效率和准确性.方法 筛选沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌的特异基因,通过参阅文献和自行设计,分别确定invA、nuc 、pfA、tlh、owpW为检测基因,优化引物浓度和引物组合,进行多重PCR扩增,产物经DHPLC进行快速检测.优化确定的方法通过重现性试验,特异性试验,灵敏度试验,以及人工污染水产品样品的检测.结果 DHPLC检测出峰顺序依次为invA、nuc、prfA、tlh、owpW,扩增片段大小为284 bp、329 bp、388 bp、450 bp、588 bp,此方法具有良好的重现性和特异性,灵敏度分别可达188 CFU/ml、670 CFU/ml、280 CFU/ml、240 CFU/ml、580 CFU/ml,不同水产品的状态、成分以及增菌液类型对后续检测不存在影响.结论 本方法可以很好的满足实际食品微生物检测的要求.