重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达

目的:为提高表达量,简化纯化工艺,获得可用于临床研究的重组人NDPK-A蛋白,构建带有6×His纯化标签的原核表达载体,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性.方法:将抑癌基因nm23-HI从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE40中;梯度变化表达条件获得产物高表达;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白;Western blot鉴定产物的免疫原性;HPLC测定产物的激酶活性;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性.结果:pQE-40中亚克隆的nm23-HI序列无误;目的蛋白最高表达量可达49.6%;纯化的表达产物能与天然NDPK-A的多克隆抗体特异结合;酶比活为472U/mg;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性.结论:表达质粒pQE-nm23HI能高效表达重组人NDPK-A,纯化工艺简便,产物活性与天然NDPK-A无异.